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菜鸟新手如何养得一手好细胞


  发表日期:2017年6月13日15:51    来源:中心实验室    作者:仝永娟    本页责编:高璐,闻卓


(以上图片来源于网络)

一养细胞深似海,从此自由是路人。开始养细胞之前就要做好随时照顾它的心理准备,三天打鱼两天晒网不仅无法养出状态绝佳的细胞,还有可能让娇贵的细胞宝宝全军覆没。那么,初次接触养细胞的科研工作者该怎样把细胞养好呢?经过对多年的养细胞经验的总结和与养细胞达人们的讨论,现总结如下几条,也大家分享。

1.选择正确的培养基

在养细胞之前,就要了解,你所养细胞的来源以及种类和名称,查阅一定量的文献,确定所需培养液种类以及是否需要添加特殊成分。常用的细胞培养液有L-DMEM、H-DMEM、α-DMEM等等,一些常见的细胞基本可以使用这几种培养基中的一种来培养,有的需要加入一定的其他成分,这需要根据不同的细胞类型,查ATCC细胞库或者查文献,才能找到所需最佳培养液。选择正确的培养液是养好细胞的第一步。

2.了解细胞的生长习性

不同的细胞生长习性不同。如成纤维细胞是贴壁生长,有一定的密度依赖性,密度小可能会出现不增殖,状态差的情况,接种密度大时则需要隔天传代,频繁传代则影响细胞状态;再如RPMI-8226人多发性骨髓瘤细胞的悬浮细胞,是悬浮生长的,传代需离心弃去上清即可。总之,了解细胞生长习性,再加上正确的计数,才能掌握好传代的密度。

3.选择优质的血清

血清中含有细胞生长所必须的生长因子,作为哺乳动物细胞培养的附加物,血清的添加是十分重要的,因此,选择优质的血清,对细胞养殖也很关键。

4.及时传代和更换培养液

在细胞增殖到一定的密度后,要及时传代,根据细胞的生长速度和密度,及时更换培养液。更换过勤,浪费培养液;更换不够及时,则细胞状态转差,一般需隔天更换培养液,具体可根据所养细胞种类予以调整。

5.绝对的无菌意识

前面林林总总全部都注意好了,如果无菌意识差,细胞中混入了微生物,则千里之堤毁于蚁穴,细菌的生长速度和破坏力,将迅速的占领培养皿,破坏细胞结构,初学者可在培养液中加入1%的双抗,但是,无菌意识不强,双抗亦无法拯救你的细胞!

6.倾心的呵护,频繁的观察

做到以上几点,你就可以开始养你的细胞了,但是再次重申细胞娇弱,在养细胞的过程中,难免会出现一些意想不到的问题,要想成功的养好细胞,需要时时惦记它,频繁的观察,初期一天观察2次都不足为过,出现任何预料外的情况,及时处理,才能保障收获一盘“漂亮”的细胞。

对于我们医学生来讲,开始做实验的第一步也许就得是养细胞,希望大家看到这篇文章后,能对养细胞入门的同僚有所帮助!

(编者按:本文栏目旨在提供学习交流平台,文章中观点不代表本网站观点。)


 
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